中试连体发酵罐随温度升高，各压力均会有所增大，需随时调节压力。当往罐内通蒸汽后，中试连体发酵罐罐内压力会逐渐升高，当罐温达到121℃时，应控制罐压在0.1Mpa左右。
保温开始后，排气阀蒸汽排量不宜太小，否则可能导致液面以上的罐体部分尤其罐盖达不到消毒温度。在灭菌完成前，启动空气压缩机和冷冻循环水机组。
1.蒸汽进夹套：缓缓开夹套蒸汽阀（此时有轻微爆破声属正常，如声音过响，则开阀的速度应减慢）。待管道排水总口排出蒸汽时适当调节排水阀，控制蒸汽排出量以有少量蒸汽冒出即可。控制夹套内压力不超过0.15Mpa。
2.当培养基预热至98℃时，适当调节夹套蒸汽阀，使培养基温度稳定在100℃左右，计时10min。此时,培养基中的溶氧接近零,标定溶氧的零点。此后微开或关闭夹套蒸汽阀。
3.当培养基温度达到100℃，蒸汽进过滤器：微开过滤器上排冷凝水阀（部分罐有2个排冷凝水阀），缓缓开过滤器前蒸汽阀，排出蒸汽管道内冷凝水。当蒸汽过滤器的排冷凝水阀出口冷凝水很少时，开连接过滤器和中试连体发酵罐的切断阀，蒸汽进入发酵罐，调节排冷凝水阀，以有少量蒸汽排出为宜。调节切断阀（切断阀不得关死）和蒸汽阀，维持过滤器前蒸汽压力为0.1~0.18Mpa。
4.当培养基温度达到100℃，蒸汽进取样器：开出料阀，开蒸汽阀，排出蒸汽管道内冷凝水。当出料口冷凝水很少时，调节出料阀，以有少量蒸汽排出即可。适当开大蒸汽阀，当蒸汽压力大于0.15Mpa，开中试连体发酵罐底阀，蒸汽从底阀进罐。调节蒸汽阀（可适当调节底阀），维持蒸汽压力为0.15~0.25Mpa。
5.当达到预定温度（常为121℃），微开接种口盖子至有少量蒸汽排出，根据罐温变化的趋势，及时调节蒸汽阀、排气阀。阀门调节宜微调应避免大幅度开关。当罐温维持在预定的范围内开始计时。
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